CAR- T细胞疗法已证明在治疗 B 细胞恶性肿瘤方面具有变革性功效，然而，高成本和制造复杂性阻碍了它们的广泛使用。除此之外还需要进行淋巴细胞清除化疗来支持CAR T细胞植入，往往会导致严重的不良反应。因此，科研人员尝试开发直接在体内进行基因工程改造，并生成CAR-T细胞的方法，希望能克服自体CAR-T细胞治疗的限制。

2024年6月，《blood》发表了题为“In vivo CAR T-cell generation in non-human primates using lentiviral vectors displaying a multi-domain fusion ligand”的文章。该研究开发了一种能够在体内产生CAR T细胞的慢病毒载体——VivoVec平台，能够以多结构域融合蛋白的形式将T细胞激活和共刺激信号整合到VivoVec颗粒 (VVP) 的表面，并显示出增强的体内转导和改进的CAR-T细胞抗肿瘤功能。在没有化疗清淋的情况下，将VVP注射到非人类灵长类动物中，大量生成抗CD20 CAR T细胞，并在超过10周的时间内完全消除B细胞。“细胞知聊”本期为您带来相关内容介绍。

使用第三代慢病毒载体，通过瞬时转染五种质粒（gagpol、rev、cocal、MDF和payload）到HEK 293T细胞中生产VivoVec™粒子。将多域融合蛋白（MDF）表达在病毒粒子表面，MDF蛋白由以下部分组成：CD58和CD80提供共刺激信号；抗CD3单链可变片段（scFv）用于特异性结合和激活T细胞。VivoVec™粒子通过淋巴结内注射递送到动物体内，激活T细胞，将CAR基因转导进T细胞生成CAR T细胞，使得T细胞能够特异性识别和杀伤肿瘤细胞。

与含有单独的共刺激分子和单独的抗CD3 scFv的颗粒相比，表达MDF蛋白的VVP（MDF VVP）表现出与T细胞的更强结合（图 2A），并导致更高的T细胞CD25表达（图 2B），而不会引起颗粒诱导的细胞因子产生增加。而且MDF VVP在体外更有效地生成CAR T细胞，特别是在低感染复数 (MOI) 的情况下（图 2C）。使用MDF VVP生成的CAR T细胞具有相当的CCR7和CD27记忆细胞标记物表面表达，在与Nalm6肿瘤细胞 共培养后产生更多的IL-2和TNF-α（图 2D），表明MDF VVP生成的CAR T细胞可能更具功能性。这些数据表明，MDF VVP 在体外更有效地生成CAR T细胞，并具有增强的抗肿瘤功能。

人源化小鼠模型有其局限性，不能包括动物的全部免疫系统，特别是完全缺乏正常发育的次级淋巴组织，并且对异种移植物抗宿主病敏感。为此研究团队在猕猴中开发了一个非人类灵长类动物(NHP)模型，在体内实验中，将NHP MDF VVPs携带的抗CD20 CAR以不同剂量通过淋巴结注射的方式注入四只动物体内。结果显示，在三只动物中，NHP MDF VVPs显著激活了T细胞，并生成了大量的CAR T细胞（分别为0.6, 3.9和11.2 cells/uL），导致B细胞在7天内消失，并在三只动物中持续消失长达76天。其中一只动物在第49天时，随着B细胞的重新出现，血液中的CAR T细胞数量也显著增加，显示出可能的记忆CAR T细胞生成。研究还观察到了与CAR T细胞相关的细胞因子释放综合症（CRS）和轻微的神经毒性症状，如震颤和短暂的癫痫活动，这些症状在使用托珠单抗和阿那白滞素后得到缓解。研究未发现明显的肝毒性，除了在一只动物的第1天出现的短暂ALT和AST升高外。最终，通过尸检和ddPCR分析，研究发现CAR转基因主要分布在注射的和相邻的淋巴结中，RNA原位杂交实验显示CAR转基因少量存在于脾脏、骨髓和肺中。这些数据表明，通过淋巴结注射的VivoVec在免疫健全的非人灵长类动物中有效生成了功能强大的CAR T细胞，无需化疗清淋，能够实现长达76天的B细胞耗竭。

信息来源：细胞知聊 官微